چهار مرحله تمايز سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي حاصل از بندناف به هپاتوسيت‌ها در داربست هيدروژلي
DOI::
https://doi.org/10.22100/jkh.v10i4.908کلمات کلیدی:
بندناف، سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي، داربست، هيدروژل، تمايزچکیده
مقدمه: باتوجه به افزايش تقاضا براي پيوند كبد و كمبود اهدا كنندگان عضو، توليد بافت كبد از طريق روش‌هاي مهندسي بافت كبد و كشت سه بعدي مورد بررسي قرار گرفته است. مطالعه حاضر با هدف جداسازی، استخراج و تمایز سلول‌های بنیادی مزانشیمی بند ناف به هپاتوسیت‌ها و ارزیابی مارکرهای سلولي و بررسی رفتار و عملكرد آنها طراحی گردید
مواد و روش‌ها: سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي از بندناف استخراج و جداسازي شده بررسی مارکرها و فنوتيپ سلول‌های بنیادی از طریق فلوسیتومتری انجام شد. سپس در طی یک دوره 14 روزه، سلول‌ها تحت چهار مرحله تمایز با عامل رشد فیبروبلاستی 4(FGF4)، عامل رشد هپاتوسیتی (HGF)، دگزامتازون (DEX)، انسولین-ترانسفرین-سلنیوم (ITS)، گلوکاگون (GLU) انکوستاتین(OSM) و تریکواستاتین (TSA) قرار گرفتند. به‌وسيله اليزا توليد اوره توسط سلول‌ها اندازه‌گيري شد. جهت بررسي بافت‌شناسی تمايز، مقاطع كشت سه بعدي تهيه شده، به‌وسيله روش هماتوکسیلین/ ائوزین رنگ‌آمیزی شد.
نتايج: سلول‌هاي حاصل از ژله وارتون ماركرهاي سطحي مزانشيمي مانند CD73 را نشان داند اما اين سلول‌ها فاقد ماركرهاي سطحي سلول‌هاي خونساز مانند CD31 بودند. پس تمايز چند مرحله‌اي سه بعدي، مورفولوژي سلول‌ها گرد شده، در داربست آلژيناتي تجمعات سلولي به‌دليل نزديك شدن سلول‌ها ديده شد. مقادير اوره در هر دو كشت سه بعدي و دو بعدي به‌طور معني‌داري در الگوي وابسته به زمان افزايش يافت. مقادير اوره در كشت سه بعدي نسبت‌به كشت دو بعدي بيشتر بود (001/0P=). با بررسي بافت‌شناسی مقاطع دركشت سه بعدي بافتي پرسلول با دستجات و صفحات سلولي با هسته يوكروماتين ديده شد.
نتيجه‌گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه تمايز 4 مرحله‌اي سلول‌هاي بنيادي با استفاده از داربست هيدروژلي باعث ظهور ويژگي‌هاي عملكردي و مورفولوژيكي سلول‌هاي هپاتوسيتي مانند ترشح اوره و ايجاد صفحات سلولي شبه كبدي مي‌گردد.
مراجع
Stadlbauer V, Davies NA, Sen S, Jalan R. Artificial liver support systems in the management of complications of cirrhosis. Semin liver dis 2008;28:96-109.
Allen JW, Hassanein T, Bhatia SN. Advances in bioartificial liver devices. Hepatology 2001;34:447-55.
Wang YJ, Li MD, Wang YM, Nie QH, Chen GZ. Experimental study of bioartificial liver with cultured human-liver cells. World J Gastroenterol 1999;5:135-7.
Fiegel HC, Kaufmann PM, Bruns H, Kluth D, Horch RE, Vacanti JP, et al. Hepatic tissue engineering: From transplantation to
customized cell‐based liver directed therapies from the laboratory. J Cell Mol Med 2008;12:56-66.
Naruse K, Tang W, Makuuchi M. Artificial and bioartificial liver support: a review of perfusion treatment for hepatic failure patients. World J Gastroenterol 2007;13:1516-21.
Ferenci P, Kramer L. MARS and the failing liver-Any help from the outer space? Hepatology 2007;46:1682-4.
Mukherjee S, Botha JF, Mukherjee U. Immunosuppression in liver transplantation. Current Drug Targets 2009;10:557-74.
Moorman AF, Vermeulen JL, Charles R, Lamers WH. Localization of ammonia‐metabolizing enzymes in human liver: Ontogenesis of heterogeneity. Hepatology 1989;9:367-72.
Puppi J, Dhawan A. Human hepatocyte transplantation overview. Methods Mol Biol 2009;481:1-16.
Cantz T, Manns MP, Ott M. Stem cells in liver regeneration and therapy. Cell Tissue Res 2008;331:271-82.
Yoon H, Jung B, Seo Y, Song K, Park J. In vitro hepatic differentiation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cell. Process Biochemistry 2010;45:1857-64.
Wang HS,Hung SC, Peng ST, Huang CC, Wei HM, Guo YJ, et al. Mesenchymal stem cells in the wharton's jelly of the human umbilical cord. Stem Cells 2004;22:1330-7.
Erices A, Conget P, Minguell JJ. Mesenchymal progenitor cells in human umbilical cord blood. Br J Haematol 2000;109:235-42.
Snykers S, De Kock J, Tamara V, Rogiers V. Hepatic differentiation of mesenchymal stem cells: in vitro strategies. Methods Mol Biol 2011;698:305-14.
Lee KD, Kuo TK, Whang-Peng J, Chung YF, Lin CT, Chou SH, et al. In vitro hepatic differentiation of human mesenchymal stem cells. Hepatology 2004;40:1275-84.
Liu WH, Song FQ, Ren LN, Guo WQ, Wang T, Feng YX, et al. The multiple functional roles of mesenchymal stem cells in participating in treating liver diseases. J Cell Mol Med 2015;19:511-20.
DongX-J, Zhang G-R, Zhou Q-J, Pan R-L, Chen Y, Xiang L-X, et al. Direct hepatic differentiation of mouse embryonic stem cells induced by valproic acid and cytokines. World Journal of Gastroenterology 2009;15:5165-75.
Tetta C, Bruno S, Fonsato V, Dereqibus MC, Camussi G. The role of microvesicles in tissue repair. Organogenesis 2011;7:105-15.
Meier RP, Mahou R, Morel P, Meyer J, Montanari E, Muller YD, et al. Microencapsulated human mesenchymal stem cells decrease liver fibrosis in mice. Journal of Hepatology 2015;62:634-41.
Liu WH, Song FQ, Ren LN, Guo WQ, Wang T, Feng YX, et al. The multiple functional roles of mesenchymal stem cells in participating in treating liver diseases. J Cell Mol Med 2015;19:511-20.
Li Y, Guo G, Li L, Chen F, Bao J, Shi YJ, et al. Three-dimensional spheroid culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells promotes cell yield and stemness maintenance. Cell Tissue Res 2015;360:297-307.
Habibollah S, Forraz N, McGuckin CP. Application of Umbilical Cord and Cord Blood as Alternative Modes for Liver Therapy. Regenerative Medicine 2015;223-41.
چاپ شده
شماره
نوع مقاله
مجوز
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
